graph LR
subgraph灭菌流程
A[冷空气排放] --> B[温度上升至121℃]
B --> C[计时保压]
C --> D[恒温灭菌]
D --> E[冷却降压]
end
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style D fill:#c8e6c9
style E fill:#fff3e0
flowchart TD
A[关闭过滤器下游阀] --> B[打开蒸汽阀]
B --> C[缓慢升压至0.11～0.15MPa]
C --> D{压力稳定?}
D -->|否| E[检查泄漏]
D -->|是| F[开始计时30min]
F --> G[保压结束]
G --> H[关闭蒸汽阀]
H --> I[缓慢泄压]
I --> J[打开下游阀恢复通气]
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style F fill:#c8e6c9
style J fill:#fff3e0
过滤器完整性检测
检测项目
方法
合格标准
起泡点测试
施加压力使气泡出现
压力≥设计起泡点
流速测试
测量通过流量
流量在允许范围内
完整性测试
压力衰减测试
压降在允许范围内
2.4.3 无菌操作控制点
无菌操作是防止微生物进入生产系统的最后防线。每一个操作细节都关乎产品质量。
移种管路灭菌参数
参数
标准值
说明
蒸汽压力
0.15～0.18 MPa
必须达到此范围
保压时长
≥30分钟
计时从达到压力开始
温度
121～125℃
饱和蒸汽温度
⚠️ 安全红线: 移种管路灭菌压力必须≥0.15 MPa，低于此值可能导致杂菌存活。
移种压差维持
参数
标准值
说明
供体罐压差
0.15～0.20 MPa
种子罐压力
受体罐压差
0.03～0.05 MPa
目标罐压力
压差要求
≥0.15 MPa
确保流动方向正确
无菌操作规范要点
flowchart TD
A[操作前准备] --> B[超净台开启30min]
B --> C[紫外消毒]
C --> D[人员洗手消毒]
D --> E[穿戴无菌手套]
E --> F[器材准备]
F --> G[火焰保护操作]
G --> H[快速过火管口]
H --> I[接种/转移操作]
I --> J[记录]
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style G fill:#fff3e0
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超净工作台使用规范
项目
要求
备注
提前开启
≥30分钟
建立稳定层流
紫外消毒
照射30分钟
人员必须撤离
风速
0.3～0.5 m/s
层流均匀
**工作面洁净度
局部A级
背景C级
2.4.4 参数监控控制点
发酵过程中的参数监控是发现异常的”眼睛”。及时识别参数异常是防止染菌扩散的关键。
DO（溶氧）异常阈值
DO表现
状态
可能原因
处置措施
2-5小时内骤降至0
⚠️ 典型染菌信号
好氧杂菌爆发
立即镜检，确认后灭活排放
不降反升
⚠️ 隐蔽染菌信号
杂菌抑制生产菌
镜检+测菌浓确认
长时间固定值
⚠️ 电极故障
膜老化/损坏
校准电极，综合判断
剧烈波动
⚠️ 设备异常
搅拌/供气不稳
检查设备
graph TD
A[DO监控] --> B{DO趋势正常?}
B -->|是| C[继续监测]
B -->|否| D{DO骤降至0?}
D -->|是| E[高度怀疑染菌]
D -->|否| F{DO不降反升?}
F -->|是| G[怀疑杂菌抑制]
F -->|否| H[检查电极/设备]
E --> I[立即取样镜检]
G --> I
H --> J[校准/维修]
I --> K{镜检确认染菌?}
K -->|是| L[灭活排放]
K -->|否| M[继续观察]
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style L fill:#ff4444,color:#fff